产品货号：
YT916
中文名称：
LP2000转染试剂
英文名称：
LP2000 Transfection Reagent
产品规格：
0.5ml|1.5ml|5×1.5ml
发货周期：
1～3天
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本转染试剂是一种非常高效的新型转染试剂，达到了国际最主流转染试剂的转染效果。适用于把质粒、siRNA或其它形式的核酸包括DNA、RNA、寡核苷酸、以及核酸蛋白复合物或带负电荷的蛋白转染到真核细胞中，也可以用于活体动物的核酸转染以用于基因治疗。对于六孔板，一个包装的本转染试剂大约可以转染100个孔；对于24孔板，一个包装的本转染试剂大约可以转染500个孔。
LP2000转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明显的细胞毒性，并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。
LP2000转染试剂的使用方法和常用的Lipofectamine 2000 Reagent完全一致。并且经过对HEK293T、Hela、NIH3T3、HEK293FT、CHO等细胞的测试，转染效率也和Lipofectamine 2000 Reagent相当甚至略高。
LP2000转染试剂不仅适用于质粒、siRNA等单一成分的细胞转染，也适合多个质粒或者质粒与siRNA等的组合转染。
LP2000转染试剂转染过表达质粒后，通常24～48小时后达到较高的蛋白表达水平，并且很多情况下蛋白表达量在转染后48小时显著高于转染后24小时；转染siRNA通常3～5天后对于目的基因的下调水平会比较理想。
LP2000转染试剂转染细胞时，基本不受细胞培养液中的血清和抗生素的影响，即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素的含血清的细胞培养液。
LP2000转染试剂的转染效果可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。
LP2000转染试剂与Lipofectamine 2000 Reagent转染效果比较请参考图1-6。
图1.LP2000转染试剂与Lipofectamine 2000 Reagent转染效率的比较。仅转染试剂不同，其余条件一致。
图2.LP2000转染试剂(A-B)与Lipofectamine2000 Reagent(C-D)用EGFP表达质粒转染HEK293T细胞后的实拍效果图。
图3.LP2000转染试剂(A-B)与Lipofectamine2000 Reagent(C-D)用EGFP表达质粒转染Hela细胞后的实拍效果图。
图4.LP2000转染试剂(A-B)与Lipofectamine2000 Reagent(C-D)用EGFP表达质粒转染NIH3T3细胞后的实拍效果图。
图5.LP2000转染试剂(A-B)与Lipofectamine2000 Reagent(C-D)用EGFP表达质粒转染HEK293FT细胞后的实拍效果图。
图6.LP2000转染试剂(A-B)与Lipofectamine2000 Reagent(C-D)用EGFP表达质粒转染CHO细胞后的实拍效果图。
注意事项：
保存条件：
4℃保存。长期不使用可以-20℃保存。
使用说明：
一、DNA转染：
二、siRNA转染：
常见问题：
附录：
常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：
*Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer,and the listed sizes are from Corning.
**These wells or dishes are square.
相关搜索：LP2000转染试剂，LP2000 Transfection Reagent
LP2000转染试剂对于常见的哺乳动物细胞具有非常高的转染效率、重复性好、操作简单、无明显的细胞毒性，并且对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。
LP2000转染试剂的使用方法和常用的Lipofectamine 2000 Reagent完全一致。并且经过对HEK293T、Hela、NIH3T3、HEK293FT、CHO等细胞的测试，转染效率也和Lipofectamine 2000 Reagent相当甚至略高。
LP2000转染试剂不仅适用于质粒、siRNA等单一成分的细胞转染，也适合多个质粒或者质粒与siRNA等的组合转染。
LP2000转染试剂转染过表达质粒后，通常24～48小时后达到较高的蛋白表达水平，并且很多情况下蛋白表达量在转染后48小时显著高于转染后24小时；转染siRNA通常3～5天后对于目的基因的下调水平会比较理想。
LP2000转染试剂转染细胞时，基本不受细胞培养液中的血清和抗生素的影响，即可以在血清和抗生素存在的情况下进行细胞转染。但为了取得最佳的转染效果，推荐转染时使用不含抗生素的含血清的细胞培养液。
LP2000转染试剂的转染效果可以通过转染表达EGFP等荧光蛋白的质粒进行快速鉴定。
LP2000转染试剂与Lipofectamine 2000 Reagent转染效果比较请参考图1-6。
图1.LP2000转染试剂与Lipofectamine 2000 Reagent转染效率的比较。仅转染试剂不同，其余条件一致。
图2.LP2000转染试剂(A-B)与Lipofectamine2000 Reagent(C-D)用EGFP表达质粒转染HEK293T细胞后的实拍效果图。
图3.LP2000转染试剂(A-B)与Lipofectamine2000 Reagent(C-D)用EGFP表达质粒转染Hela细胞后的实拍效果图。
图4.LP2000转染试剂(A-B)与Lipofectamine2000 Reagent(C-D)用EGFP表达质粒转染NIH3T3细胞后的实拍效果图。
图5.LP2000转染试剂(A-B)与Lipofectamine2000 Reagent(C-D)用EGFP表达质粒转染HEK293FT细胞后的实拍效果图。
图6.LP2000转染试剂(A-B)与Lipofectamine2000 Reagent(C-D)用EGFP表达质粒转染CHO细胞后的实拍效果图。
注意事项：
- 使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率。对于质粒，可以使用百奥莱博的质粒大量抽提试剂盒(YT003)进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。
- 转染前细胞必须处于良好的生长状态。
- 需自备不含抗生素的无血清培养液或Opti-MEM培养液或普通的DMEM培养液。
- LP2000转染试剂不能vortex或离心，宜缓慢晃动混匀。
- LP2000转染试剂使用后请立即盖好盖子，避免长时间暴露在空气中，影响转染效率。
保存条件：
4℃保存。长期不使用可以-20℃保存。
使用说明：
一、DNA转染：
- 细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18～24小时)按照每孔约20～70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约70～90%。
- 在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2mL新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。
- 参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125μL不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM Medium，然后于其中一管加入2.5μg质粒DNA，并用枪轻轻吹打混匀；另一管加入5μL LP2000转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。室温静置5分钟后(通常最长不宜超过25分钟)，将含有DNA的培养液用枪轻轻加入含LP2000转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置5分钟(室温存放6小时内稳定)。
96-well 48-well 24-well 12-well 6-well 6cm dish 10cm dish LP2000转染试剂 0.2μL 0.5μL 1μL 2μL 5μL 10μL 30μL 无血清培养液或Opti- MEM Medium 5μL 12.5μL 25μL 50μL 125μL 250μL 750μL DNA 100ng 250ng 500ng 1μg 2.5μg 5μg 15μg 无血清培养液或Opti- MEM Medium 5μL 12.5μL 25μL 50μL 125μL 250μL 750μL 稀释好的LP2000转染试剂和DNA分别室温静止放置5分钟，随后两者混合并混匀再室温静止放置5分钟 每孔加入的混合物的量 10μL 25μL 50μL 100μL 250μL 500μL 1500μL 按照上述用量每孔均匀滴加LP2000转染试剂和DNA的混合物，4～6小时后更换培养液或直接继续培养
注意：- 对于六孔板中一个孔的细胞，LP2000转染试剂的用量可以在3～12.5μL范围内进行适当调节，DNA用量建议固定在2.5μg，但也可以在1～4μg的范围内进行适当调节。通常质粒用量(μg)和LP2000(μl)的用量比例为1:2或1:3比较常用，如有必要可以在1:0.5-1:5的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为1:2，此时LP2000的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。
- 质粒的浓度宜控制在0.5～5μg/μl范围内。
- 对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的LP2000转染试剂和DNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育5分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。
- 对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。
- 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔250μL LP2000转染试剂-DNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。
- 为达到最高的转染效率，细胞在转染后培养4～6小时后宜更换为新鲜的完全培养液(对于Hela细胞，推荐在转染4小时后更换培养液，对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6小时后更换培养液)。
- 继续培养约24～48小时后，即可用适当方式检测转染效果，例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等，或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。
二、siRNA转染：
- 细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿可参考六孔板)：在转染前一天(18～24小时)按照每孔约20～70万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度等而定)接种到六孔板内进行培养，使第二天细胞密度能达到约30～50%。
- 在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2mL新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。
- 参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125μL不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM Medium，然后于其中一管加入100pmol siRNA，并用枪轻轻吹打混匀；而另一管加入5μL LP2000转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。室温静置5分钟后(通常最长不宜超过25分钟)，将含有siRNA的培养液用枪轻轻加入含LP2000转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置5分钟(室温存放6小时内稳定)。
96-well 48-well 24-well 12-well 6-well 6cm dish 10cm dish LP2000转染试剂 0.2μL 0.5μL 1μL 2μL 5μL 10μL 30μL 无血清培养液或Opti- MEM Medium 5μL 12.5μL 25μL 50μL 125μL 250μL 750μL siRNA 4pmol 10pmol 20pmol 40pmol 100pmol 200pmol 600pmol 无血清培养液或Opti- MEM Medium 5μL 12.5μL 25μL 50μL 125μL 250μL 750μL 稀释好的LP2000转染试剂和siRNA分别室温静止放置5分钟，随后两者混合并混匀再室温静止放置5分钟 每孔加入的混合物的量 10μL 25μL 50μL 100μL 250μL 500μL 1500μL 按照上述用量每孔均匀滴加LP2000转染试剂和siRNA的混合物，4～6小时后更换培养液或直接继续培养
注意：- 对于六孔板中一个孔的细胞，LP2000转染试剂的用量可以在2.5～7.5μL范围内进行适当调节，siRNA用量可以在50-250pmol的范围内进行适当调节。通常siRNA用量(pmol)和LP2000(μl)的用量比例为20:1，如有必要可以在10:1-40:1的范围内优化转染效果，上表推荐的比例为20:1，此时LP2000的用量相对较少，既经济又高效。最佳的转染条件，因不同的细胞类型和培养条件而有所不同，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。
- siRNA的推荐浓度为20μM，常用的浓度范围为10～50μM。
- 对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况可以把每个孔所需的LP2000转染试剂和siRNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育5分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。
- 对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养器皿的培养面积按比例进行换算。如果转染寡核苷酸或RNA等可以参考转染DNA的条件进行。
- 无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，按照六孔板每孔250μL LP2000转染试剂-siRNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。
- 为达到最高的转染效率，细胞在转染后培养4～6小时后宜更换为新鲜的完全培养液(对于Hela细胞，推荐在转染4小时后更换培养液，对于NIH3T3、CHO、HEK293T和HEK293FT细胞，推荐在转染6小时后更换培养液)。
- 继续培养3～5天后，即可用适当方式检测siRNA对于靶基因的下调效果，例如qPCR、Western、ELISA、报告基因等。
常见问题：
- 转染效率低：
- 优化质粒与LP2000转染试剂比例，对于难转染的细胞，可适当加大质粒用量。
- 应用高纯度、无菌、无污染物的质粒进行转染，DNA纯度方面A260/A280比值要接近1.8，通常宜控制在1.8～1.9范围内，偏低则有可能有蛋白污染，偏高则有可能有RNA污染。可以使用百奥莱博生产的质粒大量抽提试剂盒(YT003)进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。
- 贴壁细胞转染时状态良好，细胞密度达30～50%时才可进行转染，过稀可能影响转染效率，细胞密度达到50～90%时通常不会影响转染效率。不同细胞的最佳转染密度需要自行摸索。悬浮细胞宜在对数生长期进行转染。
- 需使用无抗生素和无血清培养液配制LP2000转染试剂和质粒或siRNA等的混合物。
- 转染后培养时间不足，而被误以为转染效率偏低。不同细胞转染后至显著表达所需要培养的时间通常为24～48小时。
- 检查细胞是否有支原体感染，支原体感染会影响细胞增殖，并很可能影响转染效率。
- 如果没有检测到目的蛋白表达，应该仔细核对转染质粒的测序结果，确保测序结果和读码框完全正确。
- 如果靶基因的敲减(knockdown)效果欠佳，应该考虑尝试设计不同的siRNA。
- 细胞毒性较大：
- 缩短转染时间，在转染后较短时间内更换新鲜的细胞培养液。
- 减少质粒用量，按照比例减少LP2000转染试剂。
- 检查是否转染时细胞密度太低。
附录：
常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：
| Multiple Well Plates or Dishes | Single Well Only for Plates | |||||
| Diameter (Bottom,mm)* | Growth Area (cm2)* | Average Cell Yield | Total Well Volume (ml) | Working Volume (ml) | Recommended Volume (ml) | |
| 6 well | 34.8 | 9.5 | 9.5×105 | 16.8 | 1.9-2.9 | 2 |
| 12 well | 22.1 | 3.8 | 3.8×105 | 6.9 | 0.76-1.14 | 1 |
| 24 well | 15.6 | 1.9 | 1.9×105 | 3.4 | 0.38-0.57 | 0.5 |
| 48 well | 11.0 | 0.95 | 9.5×104 | 1.6 | 0.19-0.285 | 0.25 |
| 96 well | 6.4 | 0.32 | 3.2×104 | 0.36 | 0.10-0.20 | 0.1 |
| 384 well | 2.7 | 0.056 | 5.6×103 | 0.112 | 0.025-0.050 | 0.030 |
| 1536 well | 1.63×1.63** | 0.025 | 2.5×103 | 0.0125 | 0.005-0.010 | 0.010 |
| 3.5cm dish | 34 | 9 | 9.0×105 | NA | 1.8-2.7 | 2 |
| 6cm dish | 52 | 21 | 2.1×106 | NA | 4.2-6.3 | 5 |
| 10cm dish | 8.4 | 55 | 5.5×106 | NA | 11-16.5 | 12 |
| 15cm dish | 14 | 152 | 1.5×107 | NA | 30.4-45.6 | 35 |
| 24.5cm dish | 22.4×22.4** | 500 | 5.0×107 | NA | 100-150 | 120 |
*Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer,and the listed sizes are from Corning.
**These wells or dishes are square.
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